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植物克隆技術(shù)流程
【更新時間:2014-02-26】 【 打印 】 【 關(guān)閉 】【 我要頂
克隆是英文“clone"的音譯:實際上它是無性繁殖的意思,它是指利用生物的一個離體組織材料甚至是細胞也能培養(yǎng)出來新生的生物體,目前,隨著克隆羊及克隆人的順利實驗成功,克隆技術(shù)已不在是一個神秘的話題,而我們所說的“植物克隆”實際上包括了各種無性繁殖方法,由于“植物的組織培養(yǎng)技術(shù)”較早的發(fā)展,所以,現(xiàn)在我們所說的“植物克隆”一般都是說的“植物組織培養(yǎng)技術(shù)”。自19世紀后半葉世紀“植物組織培養(yǎng)技術(shù)“提出來到現(xiàn)在,該項技術(shù)還一直是高校院所及大型企業(yè)才有可能完全擁有的技術(shù),并且其育苗成本也是相當?shù)捏@人,以下就植物“組織培養(yǎng)技術(shù)”的一般流程加以描述:從以下的描述大家也可以對比一下“植物非試管快繁技術(shù)”的操作流程,比較一下它們掌握的難易性。


植物克隆技術(shù)技術(shù)是是利用離體培養(yǎng)技術(shù)在試管內(nèi)大量繁殖植物種苗的方法。它是將植株上的細胞或小塊組織(比如一塊葉片、一段莖節(jié)、一個芽、一個花蕾中一?;ǚ鄣龋┰谂囵B(yǎng)瓶中培養(yǎng),在短短幾個月時間內(nèi)便能繁殖出成千上萬個新的植株。植物克隆技術(shù)優(yōu)勢主要是快速、周年生產(chǎn)、變異小、無需種子繁殖等等。植物克隆工廠是指利用環(huán)境控制和自動化高新技術(shù)進行植物全年生產(chǎn)的體系,包括無土栽培、植物克隆等技術(shù)以及植物細胞和組織培養(yǎng)的工業(yè)化產(chǎn)體系。1957年世界上第一工廠誕生在丹麥到1998年,日本有用于研究、展示、生產(chǎn)的植物工廠近四十個,其中生產(chǎn)用植物工廠17個。植物工廠建造雖未達到應用普及發(fā)展的時期,但其 出現(xiàn)預示著將來的發(fā)展前景。植物克隆工廠,其生產(chǎn)采用全封閉的方式,嚴格實行全面和有效的控制環(huán)境及先進的植物工程技術(shù),使生產(chǎn)到采收的全過程連續(xù)進行并高度自動化、流水化作業(yè),實現(xiàn)全年連續(xù)的生產(chǎn),完全擺脫了自然條件的限制。


植物克隆技術(shù)基本過程:

一、培養(yǎng)基的制備
1、 母液的配制和保存為減少工作量一般將各種成分配成比所需濃度高10-100被的母液,用時按比例稀釋。在配制大量元素無機鹽母液時,要防止在混合各種鹽類時產(chǎn)生沉淀,為此各種藥品必須在充分溶解后才能混合,同時在混合時要注意先后順序,把鈣離子、錳離子、鋇離子和硫酸根、磷酸根錯開,以免發(fā)生作用,相互結(jié)合生成沉淀。另外在混合各種無機鹽時,稀釋度要大,慢慢混合,同時邊混合邊攪拌。配制好的母液分別貼好標簽,注明母液號、配制倍數(shù)、日期及配制1L培養(yǎng)基時應取的量。母液儲存于2-4℃的冰箱中。2、 培養(yǎng)基的配制(1) 稱取規(guī)定數(shù)量的瓊脂和蔗糖,加入一定量的蒸餾水,加熱使其溶解。(2)在燒杯中加入規(guī)定量的各種母液,包括生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和其他的特殊補加物。(3) 將母液混合物加入融化的瓊脂中,再加入糖類物質(zhì),定容至所需體積,攪勻。(4) 用1mol/L的氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)pH值。(5)趁熱將培養(yǎng)基分裝到所選用的培養(yǎng)容器中。(6)用棉塞或封口膜蓋住瓶口。(7)在121-126℃滅菌15-20min。(8)滅菌后,待壓力歸零后將培養(yǎng)基取出讓其凝固。

二、材料的消毒與接種1、 材料的選擇和確定不同種類的植物以及同種植物不同的器官對誘導條件的反應是不一致的,因此,在取材時要充分考慮季節(jié)的影響、器官的生理狀態(tài)和發(fā)育年齡、取材的部位以及材料的大小。
2、 材料的消毒一般材料先用自來水沖洗,再用70%的酒精浸泡數(shù)秒,倒去酒精,再用0.1%的升汞溶液或2-10%的次氯酸鈉溶液浸泡10-15min,后用無菌水沖洗3-5次。3、 接種將材料切成所需的形狀和大小,接入培養(yǎng)基中。


三、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根與移栽

1. 初代培養(yǎng)在初代培養(yǎng)基上,外植體經(jīng)不同的途徑可以誘導出愈傷組織、直接分化出芽或誘導出胚狀體。
2、 繼代培養(yǎng)將初代培養(yǎng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上,使愈傷組織分化出叢生芽、不定芽繼續(xù)增殖、胚狀體發(fā)育成完整植株。
3、 生根將健壯的試管苗插入生根培養(yǎng)基中,誘導根的形成。
4、 試管苗的移栽打開瓶蓋,逐漸降低濕度,并逐漸增強光照,進行馴化,以適應環(huán)境,經(jīng)過一段時間的煉苗即可移入盆中。

(來源:中國植物網(wǎng) 作者: Root)
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